(Srauto citometrija, FCM) yra ląstelių analizatorius, matuojantis nudažytų ląstelių žymenų fluorescencijos intensyvumą. Tai aukštųjų technologijų technologija, sukurta remiantis pavienių elementų analize ir rūšiavimu. Jis gali greitai išmatuoti ir klasifikuoti ląstelių dydį, vidinę struktūrą, DNR, RNR, baltymus, antigenus ir kitas fizines ar chemines savybes ir gali būti pagrįstas šių klasifikacijų rinkiniu.
Srauto citometras daugiausia susideda iš šių penkių dalių:
1 Srauto kamera ir skysčių sistema
2 Lazerinis šviesos šaltinis ir spindulio formavimo sistema
3 Optinė sistema
4 Elektronika, saugojimo, rodymo ir analizės sistema
5 Ląstelių rūšiavimo sistema
Tarp jų, lazerio sužadinimas lazerio šviesos šaltinyje ir pluošto formavimo sistemoje yra pagrindinis fluorescencinių signalų matavimas srauto citometrijoje. Sužadinimo šviesos intensyvumas ir ekspozicijos laikas yra susiję su fluorescencinio signalo intensyvumu. Lazeris yra nuoseklus šviesos šaltinis, galintis užtikrinti vieno bangos ilgio, didelio intensyvumo ir didelio stabilumo apšvietimą. Tai idealus sužadinimo šviesos šaltinis, atitinkantis šiuos reikalavimus.
Tarp lazerio šaltinio ir srauto kameros yra du cilindriniai lęšiai. Šie lęšiai fokusuoja iš lazerio šaltinio skleidžiamą apskrito skerspjūvio lazerio spindulį į elipsinį mažesnio skerspjūvio (22 μm × 66 μm) spindulį. Lazerio energija šiame elipsiniame spindulyje paskirstoma pagal normalų pasiskirstymą, užtikrinant pastovų apšvietimo intensyvumą ląstelėms, praeinančioms per lazerio aptikimo sritį. Kita vertus, optinė sistema susideda iš kelių lęšių, skylučių ir filtrų rinkinių, kuriuos galima grubiai suskirstyti į dvi grupes: prieš srauto kamerą ir pasroviui.
Optinė sistema prieš srauto kamerą susideda iš lęšio ir skylutės. Pagrindinė lęšio ir skylutės (dažniausiai dviejų lęšių ir skylutės) funkcija – sufokusuoti lazerio šaltinio skleidžiamą apskrito skerspjūvio lazerio spindulį į mažesnio skerspjūvio elipsinį spindulį. Tai paskirsto lazerio energiją pagal normalų pasiskirstymą, užtikrindamas pastovų ląstelių apšvietimo intensyvumą lazerio aptikimo srityje ir sumažindamas išsklaidytos šviesos trukdžius.
Yra trys pagrindiniai filtrų tipai:
1: Ilgo pralaidumo filtras (LPF) – leidžia prasiskverbti tik šviesai, kurios bangos ilgis yra didesnis už tam tikrą reikšmę.
2: Trumpojo pralaidumo filtras (SPF) – leidžia prasiskverbti tik šviesai, kurios bangos ilgis yra mažesnis už tam tikrą vertę.
3: Juostos pralaidumo filtras (BPF) – leidžia prasiskverbti tik tam tikro bangos ilgio diapazono šviesai.
Skirtingi filtrų deriniai gali nukreipti skirtingų bangos ilgių fluorescencinius signalus į atskirus fotodaugintuvo vamzdelius (PMT). Pavyzdžiui, filtrai, skirti aptikti žalią fluorescenciją (FITC) priešais PMT, yra LPF550 ir BPF525. Oranžinės-raudonos fluorescencijos (PE) aptikimui prieš PMT naudojami filtrai yra LPF600 ir BPF575. Filtrai, skirti raudonai fluorescencijai (CY5) aptikti priešais PMT, yra LPF650 ir BPF675.
Srauto citometrija daugiausia naudojama ląstelių rūšiavimui. Tobulėjant kompiuterinėms technologijoms, vystantis imunologijai ir išradus monokloninių antikūnų technologiją, jos taikymas biologijoje, medicinoje, farmacijoje ir kitose srityse vis labiau plinta. Šios programos apima ląstelių dinamikos analizę, ląstelių apoptozę, ląstelių tipavimą, naviko diagnostiką, vaistų veiksmingumo analizę ir kt.
Paskelbimo laikas: 2023-09-21
