(Srauto citometrija, FCM) – tai ląstelių analizatorius, matuojantis nudažytų ląstelių žymeklių fluorescencijos intensyvumą. Tai aukštųjų technologijų technologija, sukurta remiantis atskirų ląstelių analize ir rūšiavimu. Ji gali greitai išmatuoti ir klasifikuoti ląstelių dydį, vidinę struktūrą, DNR, RNR, baltymus, antigenus ir kitas fizines ar chemines savybes ir gali būti pagrįsta šių klasifikacijų rinkimu.
Srauto citometras daugiausia susideda iš šių penkių dalių:
1 Srauto kamera ir skysčių sistema
2 Lazerinis šviesos šaltinis ir spindulio formavimo sistema
3 Optinė sistema
4 Elektronika, saugojimo, rodymo ir analizės sistema
5 Ląstelių rūšiavimo sistema
Tarp jų lazerinis sužadinimas lazerio šviesos šaltinyje ir spindulio formavimo sistemoje yra pagrindinis fluorescencijos signalų matavimas srauto citometrijoje. Sužadinimo šviesos intensyvumas ir ekspozicijos laikas yra susiję su fluorescencijos signalo intensyvumu. Lazeris yra koherentinės šviesos šaltinis, galintis užtikrinti vieno bangos ilgio, didelio intensyvumo ir didelio stabilumo apšvietimą. Tai idealus sužadinimo šviesos šaltinis, atitinkantis šiuos reikalavimus.
Tarp lazerio šaltinio ir srauto kameros yra du cilindriniai lęšiai. Šie lęšiai fokusuoja iš lazerio šaltinio skleidžiamą apskrito skerspjūvio lazerio spindulį į mažesnio skerspjūvio elipsinį spindulį (22 μm × 66 μm). Šiame elipsiniame spindulyje lazerio energija pasiskirsto pagal normalų pasiskirstymą, užtikrinant pastovų apšvietimo intensyvumą ląstelėms, einančioms per lazerio aptikimo sritį. Kita vertus, optinę sistemą sudaro keli lęšių, filtrų ir filtrų rinkiniai, kuriuos galima apytiksliai suskirstyti į dvi grupes: prieš ir po srauto kameros.
Optinė sistema, esanti prieš srauto kamerą, susideda iš lęšio ir mažo skersmens angos. Pagrindinė lęšio ir mažo skersmens angos (paprastai dviejų lęšių ir mažo skersmens angos) funkcija – sufokusuoti lazerio šaltinio skleidžiamą apskrito skerspjūvio lazerio spindulį į mažesnio skerspjūvio elipsinį spindulį. Tai paskirsto lazerio energiją pagal normalų pasiskirstymą, užtikrindama pastovų apšvietimo intensyvumą ląstelėms visame lazerio aptikimo plote ir sumažindama pašalinės šviesos trukdžius.
Yra trys pagrindiniai filtrų tipai:
1: Ilgalaikio praleidimo filtras (LPF) – praleidžia tik šviesą, kurios bangos ilgis yra didesnis nei tam tikra vertė.
2: Trumpųjų pralaidų filtras (SPF) – praleidžia tik šviesą, kurios bangos ilgis yra mažesnis už tam tikrą vertę.
3: Juostinis filtras (BPF) – praleidžia tik tam tikro bangos ilgio diapazono šviesą.
Skirtingi filtrų deriniai gali nukreipti skirtingo bangos ilgio fluorescencijos signalus į atskirus fotodaugintuvus (PMT). Pavyzdžiui, filtrai, skirti žaliai fluorescencijai (FITC) aptikti priešais PMT, yra LPF550 ir BPF525. Filtrai, naudojami oranžinei-raudonai fluorescencijai (PE) aptikti priešais PMT, yra LPF600 ir BPF575. Filtrai, skirti raudonai fluorescencijai (CY5) aptikti priešais PMT, yra LPF650 ir BPF675.
Srauto citometrija daugiausia naudojama ląstelių rūšiavimui. Tobulėjant kompiuterinėms technologijoms, imunologijai ir išradus monokloninių antikūnų technologiją, jos taikymas biologijoje, medicinoje, farmacijoje ir kitose srityse tampa vis plačiau paplitęs. Šios taikymo sritys apima ląstelių dinamikos analizę, ląstelių apoptozę, ląstelių tipizavimą, navikų diagnostiką, vaistų veiksmingumo analizę ir kt.
Įrašo laikas: 2023 m. rugsėjo 21 d.
